Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов Страница 65

через 13–15 мин, а затем постепенно уменьшается. Фотометрируют всегда через один и тот же промежуток времени после добавления рабочего реактива в кюветах с длиной оптического пути 1 см с красным светофильтром (длина волны 625 нм) против холостого опыта, который ставят одновременно с рабочими пробами, но вместо мочи берут физиологический раствор хлорида натрия. При приготовлении калибровочного графика вместо проб мочи берут 0,1 мл соответствующего калибровочного раствора.

Расчет можно проводить по правилу пропорций или по калибровочному графику, для построения которого на одной оси откладывают концентрацию глюкозы (ммоль/л), а на другой – величину экстинкции.

Существуют другие методы определения уровня сахара в моче (титрационный, бродильный), которые редко применяют в практических лабораториях.

Определение уровня других видов сахаров (левулезы, лактозы, галактозы)

При необходимости пользуются различными пробами (цветные качественные, бродильные, вращение поляризованного света, образование озазонов и пр.).

Из этих проб специфическими являются только бактериальное разложение, хроматографическое исследование и энзимные пробы.

Определение уровня молочного сахара (лактозы)

Лактоза появляется в моче беременных и кормящих женщин. Положительная качественная реакция на лактозу позволяет исключить в этих случаях глюкозурию, которая обусловлена другой патологией. Лактоза дает те же реакции восстановления, что и глюкоза. Плоскость поляризации вращает вправо.

Необходимые реактивы

1. 10%-ный раствор едкого натра.

2. Аммиак (не слабее 10%).

Ход исследования

К 8–10 мл мочи приливают 4–5 мл аммиака и 5–10 капель щелочи, нагревают на водяной бане при температуре 60–70 °С. В присутствии лактозы появляется розовое окрашивание. Глюкоза дает желтое окрашивание.

Количество лактозы определяют в поляризационном аппарате. Полученный результат умножают на 0,947.

Определение фруктозы (левулезы)

Левулеза иногда встречается в моче при нарушении обмена веществ и при диабете (вместе с глюкозой).

Необходимые реактивы

1. Резорцин.

2. Соляная кислота концентрированная.

Ход исследования

Растворяют несколько зерен резорцина в 3 мл концентрированной соляной кислоты, прибавляют двойное количество мочи и быстро нагревают на водяной бане. Пробу не следует долго кипятить, так как при этом из глюкозы может образоваться левулеза. При наличии левулезы проба окрашивается в вишнево-красный цвет. Проба считается положительной при быстром появлении интенсивной окраски.

Моча, содержащая левулезу, дает все реакции на глюкозу и вращает плоскость поляризации влево. При определении ее количества в поляриметре полученный результат умножают на 0,54. Так как фруктоза большей частью встречается одновременно с глюкозой, то вращения влево обнаружить не удается.

Определение кетоновых тел

К кетоновым телам относятся ацетон, ацетоуксусная и β– оксимасляная кислоты.

В норме с мочой выделяется 20–50 мг кетоновых тел за 24 ч.

Чаще всего кетонурия наблюдается при диабете, что является критерием правильности подбора пищевого режима: если количество вводимых жиров не соответствует количеству усвояемых углеводов, то увеличивается выделение кетоновых тел. При уменьшении введения углеводов (лечение без инсулина) при обычном количестве жиров начинает выделяться ацетон; при лечении инсулином отсутствие глюкозурии достигается лучшим усвоением углеводов и не сопровождается кетонурией. Таким образом, исследование кетоновых тел в моче больных диабетом необходимо для коррекции диеты. Присутствие кетоновых тел наблюдается также при голодании, безуглеводной диете, лихорадке, у детей – при рвоте и поносе.

Кетоновые тела в моче в основном встречаются совместно, поэтому раздельное определение их клинического значения не имеет.

Большинство качественных реакций на кетоновые тела основано на их взаимодействии с нитропруссидом натрия в щелочной среде и появлении цветной реакции (образование комплексных соединений).

Унифицированная проба Ланге

Принцип метода

Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами (ацетоуксусной кислотой, β-оксимасляной кислотой и ацетоном) с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Необходимые реактивы

1. Раствор натрия нитропруссида готовят из Расчета 50 г/л перед употреблением.

2. Уксусная кислота концентрированная.

3. Аммиак водный (NH4OH) – 25%-ный раствор.

Ход исследования

Исследуют мочу в первые 3 ч после мочеиспускания. В пробирку к 3–5 мл мочи приливают 5–10 капель раствора натрия нитропруссида и 0,5 мл уксусной кислоты, смешивают, а затем осторожно, по стенке пробирки, пипеткой наслаивают 2–3 мл водного раствора аммиака. Пробу считают положительной, если в течение 3 мин на границе сред образуется красно-фиолетовое кольцо.

Модифицированная проба Ротеры

Принцип метода тот же, что и в пробе Ланге.

Необходимые реактивы

1. Натрия нитропруссид, раствор из Расчета 50 г/л готовят перед употреблением.

2. Аммония сульфат.

3. Аммиак водный (NH4OH) – 25%-ный раствор.

Ход исследования

Приблизительно 200 мг сухого сульфата аммония, 5 капель мочи и 2 капли раствора натрия нитропруссида тщательно смешивают в пробирке, а затем на эту смесь осторожно наслаивают 10–15 капель раствора водного аммиака. При наличии кетоновых тел на границе раздела в течение 3–5 мин образуется красно-фиолетовое кольцо, интенсивность окраски которого позволяет ориентировочно судить о концентрации кетоновых тел в моче (табл. 35).

Таблица 35

Ориентировочная количественная оценка кетоновых тел в моче

При незначительной концентрации кетоновых тел слабое кольцо может появиться на 8–10-й минуте.

Проба Легаля

Необходимые реактивы

1. Свежеприготовленный водный раствор нитропруссида натрия (5%).

2. 10–15%-ный раствор едкого натра.

3. Уксусная кислота ледяная.

Ход исследования

К 5–6 мл мочи прибавляют несколько капель водного раствора нитропруссида натрия и 0,5 мл раствора едкого натра. Получается красное окрашивание. Добавляют 0,5–1 мл ледяной уксусной кислоты.

Если красный цвет исчезает, проба отрицательная, если сохраняется – положительная. Если получается слабая розовая окраска, то проба считается также положительной.

Метод с готовым набором для экспресс-анализа ацетона в моче

Принцип метода тот же, что и в предыдущих двух пробах.

Ход исследования

На полоску фильтровальной бумаги помещают таблетку, на которую пипеткой наносят 2 капли исследуемой мочи. Через 2 мин окраску таблетки сравнивают с цветной шкалой. Наличие ацетона вызывает фиолетовое окрашивание разной интенсивности; согласно шкале реакцию оценивают как слабоположительную, положительную и резко положительную.

Ряд фирм выпускает экспресс-тесты для определения кетоновых тел; определение с помощью таких тестов проводят строго по инструкции.

Ацетоуксусная кислота в стерильной моче стабильна до 8–10 дней, при бактериурии или большом количестве дрожжевого грибка может полностью исчезнуть в течение 24 ч. Около 20% ацетона при комнатной температуре исчезает за 24 ч, но сохраняется в холодильнике.

Кетоновые тела могут исчезать из мочи и in vivo при бактериурии.

Определение желчных пигментов

Моча здоровых людей содержит минимальные количества билирубина, которые не могут быть обнаружены качественными пробами, применяемыми в практической медицине. С мочой выделяется только билирубина глюкуронид (прямой билирубин), концентрация которого в норме в крови незначительна.

Билирубинурию наблюдают главным образом при поражениях паренхимы печени (паренхиматозных желтухах) и нарушении оттока желчи (обтурационных желтухах).

Для гемолитической желтухи билирубинурия нехарактерна, так как гемобилирубин