Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов Страница 26

Этот раствор содержит точно на 100 мг/л, или 171 мкмоль/ л, билирубина больше, чем сыворотка, взятая для приготовления раствора.

Чтобы исключить при Расчетах количество билирубина, содержащегося в этой сыворотке, при измерении на фотометре из величин экстинкции калибровочных проб вычитают величины экстинкции соответствующих разведений компенсационной жидкости.

Для приготовления компенсационной жидкости смешивают 13,9 мл той же сыворотки, которая использовалась для приготовления калибровочного раствора билирубина, 2 мл 0,1 моль/л раствора карбоната натрия и 0,1 мл 4 моль/л раствора уксусной кислоты.

Для построения калибровочного графика готовят ряд разведений с различным содержанием билирубина.

К полученным разведениям прибавляют по 1,75 мл кофеинового реактива и по 0,25 мл диазосмеси. При появлении помутнения можно добавить по 3 капли 30%-ного раствора едкого натра. Измерение проводят при тех же условиях, что и в опытных пробах, через 20 мин.

Из компенсационной жидкости готовят разведения, аналогичные калибровочным (табл. 11), и далее обрабатывают их так же, как калибровочные пробы.

Таблица 11

Определения связанного билирубина

Способ II – калибровочный график строится по готовому набору реактивов «Билирубин-эталон» («Лахема»).

Набор Био-Ла-Тест «Билирубин-эталон» включает:

1) билирубин лиофилизированный (точная концентрация билирубина приведена на этикетке флакона);

2) альбумин лиофилизированный.

Способ приготовления растворов билирубина указан в инструкции к набору.

Калибровочная кривая линейна до 170 мкмоль/л.

Примечание

На правильность метода влияет способ построения калибровочной кривой. Ряд веществ – гидрокортизон, андрогены, эритромицин, глюкокортикоиды, фенобарбитал, аскорбиновая кислота – вызывают интерференцию.

Клинико-диагностическое значение

При печеночных желтухах (гепатиты, циррозы) в крови отмечается резкое увеличение содержания билирубинглюкуронида, происходящее главным образом от разрушения печеночных клеток. Повреждение мембран гепатоцитов приводит к выходу в кровь и прямого, и непрямого билирубина.

Некоторое возрастание количества свободного билирубина наступает вследствие нарушения функции печени (уменьшения активности трансглюкуронидазы и других ферментных систем, участвующих в глюкуронидировании).

Значительное увеличение содержания билирубина сыворотки при механических (застойных) желтухах обусловлено переполнением желчных путей вследствие закупорки, разрыва их и перехода желчи в русло крови.

Обтурационные желтухи сопровождаются резким увеличением прямого билирубина в крови. Длительный застой желчи в печени может вызвать воспалительные изменения в гепатоцитах с последующим увеличением содержания непрямого билирубина сыворотки крови.

Резкое возрастание количества свободного билирубина при гемолитической желтухе происходит в результате гемолиза, приводящего к усиленному образованию непрямого билирубина.

Ряд лекарственных препаратов оказывает влияние на содержание общего билирубина. Они усиливают распад эритроцитов. К ним относятся ацетилсалициловая кислота, тетрациклин, хинин и др.

Могут увеличивать уровень прямого билирубина в плазме препараты, вызывающие задержку желчи в печени: пенициллин, эритромицин, сульфаниламидные препараты, эстрогены, пероральные контрацептивы, андрогены, никотиновая кислота.

Методы исследования показателей липидного обмена

К липидам относятся нейтральные жиры (триглицериды), холестерин (общий, свободный и связанный), фосфолипиды, гликолипиды.

Исследования обмена липидов и липопротеинов (ЛП), холестерина (ХС), в отличие от других диагностических тестов имеют социальное значение, так как требуют неотложных мероприятий по профилактике сердечно-сосудистых заболеваний.

Проблема коронарного атеросклероза показала четкую клиническую значимость каждого биохимического показателя как фактора риска ишемической болезни сердца (ИБС), и в последнее десятилетие изменились подходы к оценке нарушений липидного и липопротеинового обменов.

Риск развития атеросклеротического поражения сосудов оценивают по следующим биохимическим тестам:

1) содержание триацилглицеринов (ТГ) в сыворотке крови;

2) содержание общего холестерина (ОХС) в сыворотке крови;

3) содержание холестерина, входящего в состав липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП);

4) содержание холестерина, входящего в состав липопротеинов низкой и очень низкой плотности (ХС-ЛПНП и ХС-ЛПОНП);

5) определение отношений ОХС/ХС-ЛПВП, ХС-ЛПНП/ХС-ЛПВП.

Триглицериды

ТГ – нейтральные нерастворимые липиды, поступающие в плазму из кишечника или из печени.

В тонком кишечнике ТГ синтезируются из экзогенных, т. е. поступивших с пищей жирных кислот, глицерола и моноацилглицеролов. Образованные ТГ первоначально поступают в лимфатические сосуды, затем в виде хиломикронов (ХМ) через грудной лимфатический проток поступают в кровоток. Время жизни ХМ в плазме невелико, они поступают к жировым депо организма.

Наличием ХМ объясняется белесый цвет плазмы после приема жирной пищи. ХМ быстро освобождаются от ТГ при участии липопротеинлипазы (ЛПЛ), оставляя их в жировых тканях. В норме после 12-часового голодания ХМ не определяются в плазме. В связи с низким содержанием белка и высоким количеством ТГ ХМ при всех видах электрофореза остаются на линии старта.

Наряду с поступающими с пищей ТГ в печени из эндогенно синтезированных жирных кислот и трифосфоглицерола, источником которого является обмен углеводов, образуются эндогенные ТГ. Эти ТГ транспортируются кровью к жировым депо организма в составе липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП). ЛПОНП являются главной транспортной формой эндогенных ТГ. Содержание ЛПОНП в крови коррелирует с подъемом уровня ТГ. При высоком содержании ЛПОНП плазма крови выглядит мутной.

Для исследования ТГ используется сыворотка крови или плазма крови после 12-часового голодания. Хранение образцов возможно в течение 5–7 дней при температуре 4 °С, не допускаются повторное замораживание и оттаивание проб.

Холестерин

ХС является составной частью всех клеток организма. Он входит в состав клеточных мембран, ЛП, является предшественником стероидных гормонов (минерало– и глюкокортикоидов, андрогенов и эстрогенов).

ХС синтезируется во всех клетках организма, однако основная его масса образуется в печени и поступает с пищей. В сутки организм синтезирует до 1 г ХС.

ХС – гидрофобное соединение, основной формой транспорта которого в крови являются белок-липидные мицеллярные комплексы ЛП. Их поверхностный слой образуют гидрофильные головки фосфолипидов, аполипопротеинов. ХС эстерифицированный более гидрофилен, чем ХС, поэтому эфиры ХС с поверхности перемещаются в центр липопротеиновой мицеллы. Основная часть ХС транспортируется кровью в виде ЛПНП от печени к периферическим тканям. Аполипопротеином ЛПНП является апо-В. ЛПНП взаимодействуют с апо-В-рецепторами плазматических мембран клеток, захватываются ими путем эндоцитоза. Освобождающийся в клетках ХС используется для построения мембран и эстерифицируется. ХС с поверхности клеточных мембран вступает в мицеллярный комплекс, состоящий из фосфолипидов, апо-А, и образует ЛПВП. ХС в составе ЛПВП подвергается эстерификации под действием лецитинхолестеролацилтрансферазы (ЛХАТ) и поступает в печень. В печени поступивший в составе ЛПВП ХС подвергается микросомальному гидроксилированию, превращается в желчные кислоты. Выделение его происходит как в составе желчи, так и в виде свободного ХС или его эфиров.

Исследование уровня ХС не дает диагностической информации об определенном заболевании, а характеризует патологию обмена липидов и ЛП. Наиболее высокие цифры ХС имеют место при генетических нарушениях обмена ЛП, таких как семейная гомо– и гетерозиготная гиперхолестеринемия, семейная комбинированная гиперлипидемия, полигенная гиперхолестеринемия. При ряде заболеваний развивается вторичная гиперхолестеринемия: нефротический синдром, сахарный диабет, гипотиреоз, алкоголизм.

Для оценки состояния липидного и ЛП обмена определяют величины ОХС, ТГ, ХС ЛПВП, ХС ЛПОНП, ХС ЛПНП.

Определение этих величин позволяет рассчитать коэффициент атерогенности (Ка):